探索傷口愈合的奧秘！為小鼠進行MDK調控

帝諾戰略攜手南京醫科大學

Midkine(MDK)是一種分泌型肝素結合生長因子，為低分子量的蛋白質。Midkine在發育過程中發揮著重要作用，并在妊娠中期強烈表達。在成人中，它的表達局限于某些組織。Midkine促進細胞存活和遷移，并深入參與癌癥進展、炎癥性疾病的發生和損傷組織的修復。

實驗過程選用成年雄性ICR小鼠(20 25g)，動物被隨機分成組。用剃毛刀將小鼠右下肢的毛發剔除，并用脫毛膏脫凈毛發。將小鼠固定在固定器中，露出右下肢，將電極片剪成0.5cm2左右大小后分別貼于小鼠小腿內外兩側，通過實驗研究結果如下：

圖1

電刺激增加血漿中MDK釋放

圖1顯示不同電流強度電刺激小鼠后血漿中的MDK 水平。電刺激小鼠右下肢(100Hz，1小時，連續三天)，處死老鼠，取血(n＝4)。Western blot 檢測血漿中MDK水平。分別以三種電流強度刺激小鼠右下肢，結果顯示，2 20mA/cm2的平均電流強度均可引起血漿MDK上升，6mA/cm 2時產生的MDK水平最高。

圖2

電刺激增加了坐骨神經中MDK表達

圖2顯示不同電流強度電刺激小鼠后坐骨神經中的MDK水平，電刺激小鼠右下肢(100Hz，1小時，連續三天)，處死老鼠，取坐骨神經(n＝ 4)。Western blot檢測坐骨神經中MDK、磷酸化的AMPK和MDK受體LRP1水平。分別以三種電流強度刺激小鼠右下肢，6mA/cm2時坐骨神經中產生的MDK水平及MDK受體LRP1表達最高，而 AMPK活性無明顯變化。

圖3

電刺激增加了肌肉組織中MDK表達

圖3顯示不同電流強度電刺激小鼠后肌肉組織中的MDK水平，電刺激小鼠右下肢(100Hz，1小時，連續三天)，處死老鼠，取右腿肌肉組織 (n＝4)。Western blot檢測肌肉組織中MDK、磷酸化的AMPK和MDK受體LRP1水平。分別以三種電流強度刺激小鼠右下肢，MDK和AMPK活化呈現出電流劑量依賴性增加的趨勢，其中6mA/ cm 2時MDK受體LRP1表達最高。

圖4

電刺激可以增加坐骨神經MDK表達

圖4顯示不同頻率電刺激小鼠后坐骨神經中的MDK水平，電刺激小鼠右下肢(6mA/cm2，1小時，連續三天)，處死老鼠，取坐骨神經(n＝5)。 Western blot檢測坐骨神經中MDK、MDK受體LRP1水平，P＜0 .05vs 0Hz。分別以三種頻率刺激小鼠右下肢，結果表明坐骨神經中MDK和LRP1水平對電刺激的頻率變化不敏感。

圖5

電刺激可以增加肌肉MDK表達

圖5顯示不同頻率電刺激小鼠后肌肉中的MDK水平，電刺激小鼠右下肢(6mA/cm2，1小時，連續三天)，處死老鼠，分別取左腿和右腿肌肉(n＝ 3)。Western blot檢測雙腿中MDK水平。分別以三種頻率刺激小鼠右下肢，結果表明不同頻率對于肌肉中MDK水平影響不大。電刺激不會影響到遠隔部位肌肉中MDK的水平。

圖6

電刺激可以電刺激增加血漿中MDK釋放

圖6顯示電刺激小鼠后血漿中的MDK水平。電刺激小鼠右下肢(100Hz，6mA/cm2，連續三天)，處死老鼠，取血(n＝4)。Western blot 檢測血漿中MDK水平。分別以三種時程電刺激刺激小鼠右下肢，每天電刺激1h時全身血液中 MDK水平最高。

圖7

電刺激可以增加肌肉MDK表達

圖7顯示電刺激小鼠后肌肉中的MDK水平，電刺激小鼠右下肢(100Hz，6mA/cm2，連續三天)，處死老鼠，取右腿肌肉(n＝4)。Western blot檢測右腿中MDK、LRP1和磷酸化AMPK水平。每天電刺激0 .5h即可引起肌肉中MDK水平升高，并且隨電刺激時長的增加而增加。但是每天電刺激1 .5h時部分小鼠出現了皮膚損傷。0 .5h 1 .5h的電刺激可以增加AMPK的激活和LRP1水平。

圖8

電刺激可以增加C2C12成肌細胞MDK釋放

圖8為電刺激C2C12細胞(20Hz，100μ A)，(n＝3)，Western blot檢測細胞上清中MDK水平和細胞的MDK受體LRP1水平，P＜0 .05vs 0h。分別電刺激肌肉細胞0 .5h，1h，6h和12h后，結果表明，電刺激0 .5h和1h時，肌肉細胞釋放 MDK較多，MDK受體LRP1水平最高。